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DROSACTINCUT

Probing the mechanical properties of cells in vivo: dynamics and contractility of the acto-myosin network in Drosophila epithelial cells
Funder: French National Research Agency (ANR)Project code: ANR-05-BLAN-0158

DROSACTINCUT

Description

Le projet DrosActinCut vise à développer des méthodes spécifiques pour mesurer et déterminer le rôle des forces de tension corticale du réseau d'acto-myosine associées à la morphogenèse tissulaire in vivo. Nous étudions l'intercalation cellulaire, un processus conservé reposant sur le remodelage polarisé des interfaces adhérentes de cellules épithéliales. Le système étudié est l'embryon précoce de drosophile, un système remarquablement adapté aux méthodes récentes d'imagerie permettant de suivre la dynamique cellulaire et moléculaire in toto, et en raison des approches fonctionnelles génétiques propres au modèle drosophile. Le réseau d'acto-myosine gouverne la forme et le comportement dynamique des cellules. Notre projet vise à étudier la dynamique et les propriétés mécaniques du réseau d'actomyosine au cours du remodelage des interfaces cellulaires pendant l'intercalation. Nous suivrons la dynamique de l'actine (polymérisation et dépolymérisation) avec des techniques de fluorescence (Fluorescence Loss Induced by Photobleaching et Fluorescence Recovery after Photobleaching) et à l'aide de variants fluorescents de l'actine. Cette étude nous permettra d'observer une anisotropie possible de la dynamique de l'actine en relation avec le remodelage des jonctions adhérentes durant l'intercalation. Par ailleurs, nous approfondirons l'étude de cdGAP, une protéine Gap régulatrice de Rac1 et Cdc42, interagissant avec le réseau d'acto-myosine et impliquée dans l'intercalation cellulaire. Pour étudier les propriétés mécaniques des jonctions adhérentes et le rôle du réseau d'acto-myosine, nous développerons et utiliserons des outils optiques spécifiques. Tout d'abord, nous tenterons de modifier l'équilibre des forces agissant sur les jonctions avec un système dynamique de pinces optiques. Nous chercherons à perturber la balance des forces contradictoires du réseau contractile d'acto-myosine et d'adhésion, en exerçant des forces sur plusieurs billes placées aux jonctions. Nous développerons en outre un microscope pour réaliser la nanoablation du réseau d'acto-myosine, à l'aide d'impulsions laser femtosecondes dans le proche infra-rouge. L'étude du mouvement des filaments fragmentés et l'observation des rearrangements cellulaires nous permettront d'identifier les mécanismes moteurs de l'intercalation et probablement la distribution des «générateurs» de force responsables du remodelage des jonctions adhérentes.

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